s 《细胞生物学实验》实验教学实施大纲-南京师范大学生命科学实验教学中心
 

《细胞生物学实验》实验教学实施大纲

 

发布日期:2015-07-28  浏览次数:763


课程代码:0910206  课程学分:2

开课学期:5学期                      课程总学时/实验学时:36

开课实验室名称:生物实验教学中心

 

一、   课程概述

本课程是生物学专业开设的一门必修课,使学生掌握细胞生物学的基本实验方法和技能技巧,并在科学态度、独立工作能力方面获得初步的训练,为学生今后的学习和科研工作奠定基础。

二、   课程目标

通过细胞实验教学,使学生掌握细胞生物学的基本实验方法和原理,并能熟练运用了经典及现代细胞生物学的实验技术方法,并在科学态度、独立工作能力方面获得初步的训练,进一步提高科研思维能力及实验操作能力。

三、   课程实验内容和要求

序号

实验项目

实验类型

必做选做

时数

实验内容提要与要求

预习要求

实验评价标准

1

细胞DNA的显示—Feulgen

验证

选做

3

1.掌握Feulgen反应的基本原理和染色方法

预习Feulgen反应方程

实验操作及实验报告

2

荧光显微镜技术及线粒体、细胞核的荧光显微镜观察

验证

必做

3

1.了解荧光显微镜的基本构造和基本光路;

2.了解荧光染料Hoechst33258与细胞成分的结合特性和光谱特性

了解落射荧光显微镜光路

实验操作及荧光染色图片

3

线粒体差速离心法分离技术

 

验证

必做

3

1.掌握线粒体差速离心分离技术及原理;

2.熟悉线粒体的Janus green B 染色方法

差速离心分离法

实验操作及实验报告

4

小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察

验证

必做

3

掌握动物骨髓细胞染色体的制备方法,了解小鼠染色体的形态特点

低渗及Gimsa染色方法

实验操作及染色体图片

5

小鼠巨噬细胞吞噬实验

 

验证

必做

3

了解巨噬细胞对异物吞噬的功能,掌握小鼠巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的方法

腹腔注射方法及巨噬细胞作用

实验结果图片及实验报告

6

动物细胞融合-PEG

验证

必做

3

了解细胞融合的原理并掌握细胞细胞融合的方法

细胞融合的应用及实验方法

实验操作及实验报告

7

考马斯亮兰R250显示细胞微丝

验证

选做

3

掌握考马斯亮蓝R250显示细胞胞质微丝的方法,对细胞内微丝的分布有一个整体的认识

细胞通透处理方法

实验操作及实验报告

8

鬼笔环肽对细胞微丝的标记与观察

综合

选做

3

采用鬼笔环肽-FITCH.33258荧光显示微丝及细胞DNA分布

鬼笔环肽-FITC与肌动蛋白结合原理

实验荧光图片及实验报告

9

动物细胞培养示教录像及实验准备

综合

必做

3

了解细胞培养的基本方法及操作过程,了解细胞培养的前期准备工作

器材及试剂灭菌或除菌方法

实验操作及实验报告

10

动物细胞原代培养

 

综合

必做

3

掌握成纤维细胞的原代培养方法,强调细胞培养过程中无菌操作过程

原代培养方法

培养细胞

11

培养细胞活性检测与细胞传代培养

综合

必做

6

1.掌握细胞消化和细胞传代的方法;

2.了解并掌握染色排斥法和FDA-PI双色荧光法测定细胞活性的方法

染料据染法及双荧光显示死活细胞方法

原代细胞及活性

12

扫描及透射电镜技术

示教

选做

3

了解扫描电镜和透射电镜的基本构造和基本操作过程

样品制备方法

实验操作及实验报告

13

流式细胞术

示教

选做

3

了解流式细胞仪的基本构造和基本操作过程

流式细胞仪结构及操作

流式细胞图实验结果分析

14

小鼠骨髓间充质干细胞的分离和原代培养

设计

选做

6

了解骨髓间充质干细胞的特性及分离、纯化和传代方法,并在显微镜下予以识别和细胞生长状态判别

干细胞分离及培养方法

实验操作及实验报告

15

MTT法检测细胞的增殖

设计

选做

6

掌握MTT法检测细胞的增殖的方法

MTT检测细胞活性原理

MTT测试数据

16

干细胞(C2C12)多向分化诱导实验

设计

选做

6

掌握C2C12分化诱导和检测方法

细胞的分化诱导

诱导细胞

17

细胞转染和荧光显微镜观察

设计

选做

6

掌握细胞转染和荧光显微镜观察方法

细胞的转染

转染细胞荧光检测

四、   评价

平时成绩:占总成绩百分之30%。评定依据包括每次实验课的学习态度,操作过程要领的掌握与运用,能否得到预期的实验结果,实验报告的质量等。

考试:书面考试占百分之40-50%。操作考试占百分之20-30%,就本门课程中所进行过的各类基本操作,提供实验原始材料和必要器具,要求学生在规定时间内独立地完成,当时检查进行成绩评定。

五、   主要参考资料

细胞生物学实验指导,李素文等,高等教育出版社,2001

细胞生物学实验指导,(自编,编写者:顾曙余,曹祥荣)

六、   其它说明

对以上不能涵盖的内容作必要的说明。

课程主要实验仪器设备配备标准

序号

仪器名称

规格与型号

单位

(台套件)

用于何

实验项目

每套仪器人数

备注

1

普通光学显微镜

Nikon

30

显微观察

1

 

2

台式高速离心机

GZL-16A上海安亭

6

染色体制备

10

 

3

冷冻高速离心机

GZL上海安亭

4

差速离心

10

 

4

电热烘箱

DL-102南京实验仪器厂

2

玻璃培养瓶的烘干

20

 

5

恒温培养箱

上海跃进

3

细胞培养箱

20

 

6

恒温水浴锅

江苏东台电器厂

9

Feulgen

10

 

7

电泳仪

北京六一仪器厂

6

DNA电泳

10

 

8

电热高压灭菌锅

Tomy 50L

4

细胞培养材料的准备

30

 

9

荧光显微镜

Olympus

3

线粒体和细胞核的观察

20

 

11

电子天平

JA2003上海天平仪器厂

8

精细称量

4

 

12

冰箱

西门子250L

1

细胞培养

100

 

13

倒置显微镜

日本olympus

2

细胞观察

30

 

14

正置荧光显微镜

Nikon

2

细胞观察

30

 

 

撰写人:顾曙余、刘梅                    审订人:曹祥荣

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